هل يمكنك تسلسل منتج PCR؟

2024 مؤلف: Stanley Ellington | [email protected]. آخر تعديل: 2023-12-16 00:13

مباشر التسلسل من منتجات PCR . من الممكن جدا أن مباشرة تسلسل أ منتج PCR دون استنساخ الشظية أولاً. مباشر تسلسل PCR نادرًا ما يكون ناجحًا ما لم يكن أنت قضاء بعض الوقت في ضمان ذلك أنت لا تقع فيه واحد من العديد من الفخاخ.

بهذه الطريقة ، ما هو تسلسل PCR؟

مباشر التسلسل من PCR منتجات. يجب عليك إزالة كل PCR مواد أولية ونيوكليوتيدات غير مدمجة قبل المنتج متسلسل . التسلسل يستخدم أساسًا واحدًا فقط بدلاً من الاثنين المستخدم فيه PCR . إذا لم تقم بإزالة كلا البادئين ، فستحصل على اثنين التسلسلات متراكبة على بعضها البعض بحيث لا يمكن قراءتها.

وبالمثل ، هل يمكنني استخدام بادئات تفاعل البوليميراز المتسلسل للتسلسل؟ بادئات PCR مخصصة ل PCR التضخيم للحصول على أمبليكون. تسلسل الاشعال نكون تستخدم إلى تسلسل جزء من الحمض النووي ويكشف عن الحمض النووي الخاص به تسلسل تحديد. 4. اثنان بادئات PCR هناك حاجة في PCR رد فعل (عادة) ؛ واحد فقط التسلسل التمهيدي يضاف إلى التسلسل تفاعل.

مع مراعاة ذلك ، كيف تختبر منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل؟

كشف وتحليل منتجات PCR . ال المنتج من أ PCR يجب أن يكون جزءًا أو شظايا من الحمض النووي ذات الطول المحدد. يمكن استخدام العديد من التقنيات لاكتشاف التسلسلات المضخمة (انظر الجدول). إن الأسلوب الأبسط والأكثر استخدامًا هو الرحلان الكهربي لـ منتج PCR على هلام الاغاروز مع EtBr (بروميد إيثيديوم).

لماذا من الضروري تنقية منتجات PCR قبل التسلسل؟

طهارة من الحمض النووي من أ PCR رد الفعل عادة ضروري ل استخدام المصب ، ويسهل إزالة الإنزيمات ، والنيوكليوتيدات ، والبادئات والمكونات العازلة.