جدول المحتويات:

لماذا من الضروري تنقية منتجات PCR قبل التسلسل؟
لماذا من الضروري تنقية منتجات PCR قبل التسلسل؟

فيديو: لماذا من الضروري تنقية منتجات PCR قبل التسلسل؟

فيديو: لماذا من الضروري تنقية منتجات PCR قبل التسلسل؟
فيديو: Colony PCR movie 2024, شهر نوفمبر
Anonim

التحقق من المطلوب المنتج يكون أساس والتي تتضمن تأكيد نقص غير محدد منتجات وثنائيات التمهيدي. ينظف -أعلى من خليط التفاعل أيضًا من الضروري لإزالة البادئات غير المدمجة و dNTPs التي يمكن أن تتداخل مع ردود الفعل اللاحقة وتؤدي إلى تسلسل غير قابل للقراءة.

الى جانب ذلك ، لماذا من الضروري تنقية منتجات PCR؟

أنت بحاجه إلى تنقية منتجات PCR للتخلص من البادئات والنيوكليوتيدات والإنزيمات غير المستخدمة من أجل تحسين نجاح الربط ، والتي ستحافظ وتسلسل المنتج من PCR . إلى تنقية ال منتجات PCR ، يتم استخدام كروماتوغرافيا استبعاد الحجم.

قد يتساءل المرء أيضًا ، هل يجب عليك تنقية منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل قبل تقييد هضم نوكلياز داخلي؟ الأغلبية تقييد الانزيمات تنشط في PCR مخازن. لتطبيقات الاستنساخ ، طهارة من منتجات PCR قبل الهضم يكون من الضروري لإزالة بوليميراز الحمض النووي النشط المحب للحرارة الموجود في PCR خليط. قد تغير بوليميرات الدنا نهايات الدنا المشقوق وتقلل من محصول الربط.

يسأل الناس أيضًا ، كيف يمكنك تحضير منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل للتسلسل؟

التسلسل المباشر لمنتجات PCR

  1. تأكد من تضخيم الجزء الصحيح.
  2. يجب عليك إزالة جميع بادئات تفاعل البوليميراز المتسلسل المتبقية والنيوكليوتيدات غير المدمجة.
  3. إذا كانت البادئات PCR هي أيضًا التمهيدي التسلسلي ، فتأكد من مطابقتها لظروفنا.
  4. لا تفرط في تركيز العينة!

هل يمكنك تسلسل منتج PCR؟

مباشر التسلسل من منتجات PCR . التسلسل يستخدم فقط واحد التمهيدي بدلاً من الاثنين المستخدم فيه PCR . اذا فعلت لا تقم بإزالة كلا البرايمرين ، سوف تفعلها احصل على اثنين التسلسلات متراكبة على بعضها البعض بحيث لا يمكن قراءتها. لا بأس في استخدام ملف PCR التمهيدي ل التسلسل طالما أنها تتوافق مع ظروفنا.

موصى به: